乳酸含量(LA)試劑盒可見分光光度法說明書
可見分光光度法 50管/24樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
產(chǎn)品名稱:乳酸含量(LA)試劑盒可見分光光度法
貨號:LZ-S01166-A
規(guī)格 : 50管/24樣
測試方法:可見分光光度法
產(chǎn)品分類:糖酵解系列
發(fā)貨地:上海
測定意義:
乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物,與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān),乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。
測定原理:
乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸,同時使NAD+還原生成NADH和H+,H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原INT生成紅色物質(zhì),在530nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑的組成和配制:
提取液:液體 55mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 12mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1 支,-20℃避光保存。臨用前加入 1.5mL 蒸餾水充分溶解。
試劑四:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加 15mL 蒸餾水充分溶解。
試劑五:粉劑×1 支,4℃避光保存。
標準品:液體 1mL×1 支,4℃保存。
顯色液:臨用前根據(jù)用量按照提取液(V):試劑三(V):試劑四(V):試劑五(m)=1(mL):
0.3(mL):3(mL):15(mg)的比例充分混勻。(注意:現(xiàn)配現(xiàn)用,用多少配多少,在棕色瓶中配制,試劑盒中帶有 5 個棕色空瓶)
樣本處理
1. 組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g,加入 1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于 4℃,12000g 離心 10min,取上清測定。
2. 細胞:按照細胞數(shù)量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500萬細胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);于 4℃,12000g 離心 10min,取上清測定。
3. 血清:直接測定。
操作步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便 不時觀察,待對照管顯色適當時,即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結(jié)果,準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質(zhì) 量和軟件的算法。
生化檢測試劑盒常見問題:
在使用生化檢測試劑盒時,可能會遇到一系列常見問題,這些問題主要涉及到試劑盒的使用、保存、有效期、樣本處理以及實驗操作等方面。以下是一些常見的問題及其解決方法:
一、?測定原理?:生化試劑盒通過化學反應(yīng)或酶促反應(yīng)測定樣本中物質(zhì)的含量或酶活性。常用的儀器包括分光光度計和酶標儀,它們的測定原理基于朗伯-比耳定律。土壤、水質(zhì)、動植物組織、血清、細胞細菌、食品等樣本均可進行測定?。
?二、選擇不同規(guī)格的試劑盒?:根據(jù)實驗的實際情況選擇合適的試劑盒。如果實驗室有酶標儀且具備檢測波長,可以選擇微量法試劑盒;如果有分光光度計及相應(yīng)規(guī)格的比色皿,則可以選擇常量法或微量法試劑盒。建議購買前仔細閱讀說明書,確認自備的儀器和試劑是否符合要求?。
?三、保存方法?:收到試劑盒后,如果暫時不用,應(yīng)按照外包裝上指示的溫度保存。拆開包裝后,應(yīng)按照每個試劑的保存溫度進行保存,注意有些試劑忌反復凍融,有些粉劑溶解后性質(zhì)不穩(wěn)定?。
四、?有效期?:一般生化試劑盒的有效期為6個月,也有特殊貨號的有效期為1年。具體以實際收到貨物的標簽信息為準?1。
?五、樣本處理?:新鮮樣本和冷凍樣本都可用于大多數(shù)指標的測定,但有些生理活性物質(zhì)容易降解,建議使用新鮮樣本測定。對于冷凍樣本,建議在-70℃或液氮中保存。樣本在不同溫度下的保存時間有所不同,例如4℃可保存一周,-20℃保存一個月,-80℃保存3個月?。
?六、土壤酶活性測定?:對于土壤酶活性的測定,建議將鮮土風干并過篩后取樣,以測定的重復性。若使用鮮土測定,需樣本的顆粒大小一致且水分含量相似?。
七、?預(yù)測定?:在進行正式測定前,建議選擇2-3個預(yù)期結(jié)果差別較大的樣本做預(yù)實驗。通過預(yù)測定可以全面反映樣品特點、試劑質(zhì)量、儀器設(shè)備穩(wěn)定性和操作規(guī)范性,確保正式測定結(jié)果真實可靠?。
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